Određivanje sadržaja oksalne kiseline u voću i povrću visokoučinkovitom tekućinskom kromatografijom (HPLC)
1. Eksperimentalni princip i dizajn metode
Kao uobičajena organska kiselina u voću i povrću, sadržaj oksalne kiseline izravno utječe na okus i nutritivnu vrijednost hrane. Ovaj eksperiment koristi visokoučinkovitu tekućinsku kromatografiju obrnute faze (RP-HPLC). U uvjetima kisele mobilne faze, oksalna kiselina se odvaja od interferirajućih tvari pomoću C18 kromatografske kolone. Za kvantitativnu analizu koristi se ultraljubičasti detektor postavljen na 210 nm, na temelju UV apsorpcijskih karakteristika karboksilnih skupina u molekulama oksalne kiseline.
2. Standardna krivulja i priprema uzorka
Za pripremu standardnih otopina koristi se metoda gradijentnog razrjeđivanja: točno se odvaže 25,0 mg oksalne kiseline dihidrata i razrijedi na 25 mL ultračistom vodom kako bi se dobila osnovna otopina od 1 mg/mL. To se zatim sekvencijalno razrjeđuje u niz standardnih otopina od 50, 100, 200, 400 i 800 µg/mL, pri čemu se svaka koncentracija ubrizgava u tri primjerka.
Za pripremu uzorka koristi se ekstrakcija uz pomoć mikrovalova: izvaže se 5,00 g homogenata voća/povrća, doda se 10 mL otopine klorovodične kiseline koncentracije 0,1 mol/L, tretira se mikrovalovima na 60 °C 10 minuta, filtrira se kroz membranski filter od 0,45 µm i filtrat se skupi za ispitivanje.
3. Optimizacija kromatografskih uvjeta
Mobilna faza je sustav kalijevog dihidrogenfosfatnog pufera (pH 2,5) - acetonitrila (95:5) koncentracije 0,01 mol/L, s brzinom protoka od 0,8 mL/min i temperaturom kolone od 35 °C. Podešavanjem udjela acetonitrila pokazuje se da kada organska faza prelazi 10%, vrijeme zadržavanja oksalne kiseline skraćuje se na manje od 3 minute, ali dolazi do stvaranja repova na vrhu. Pod konačnim optimiziranim uvjetima, vrijeme zadržavanja oksalne kiseline iznosi 4,2 minute, čime se postiže potpuno odvajanje od susjedne limunske i jabučne kiseline (rezolucija > 1,5).
4. Validacija metode
Verifikacija linearnog raspona pokazuje dobar linearni odnos između površine vrha i koncentracije u rasponu od 10–1000 µg/mL (R² = 0,9993). Granica detekcije (LOD), određena metodom omjera signala i šuma, iznosi 0,5 µg/mL. U testovima ponovljivosti, RSD za šest ponovljenih određivanja istog uzorka špinata iznosi 1,8%. Eksperimenti s iskorištenjem klasa na tri razine (80%, 100% i 120%) daju prosječno iskorištenje od 98,2%, 102,4% i 97,8%, što zadovoljava zahtjeve za kvantitativnu analizu.
5. Analiza stvarnih uzoraka
Testirano je šest komercijalno dostupnih vrsta voća i povrća: špinat (356 ± 12 mg/100 g), celer (215 ± 9 mg/100 g), rajčica (18 ± 2 mg/100 g), jabuka (6 ± 1 mg/100 g), banana (nije detektirana) i brokula (89 ± 5 mg/100 g). Usporedba s nacionalnom standardnom metodom (GB 5009.277-2016) pokazuje da je relativno odstupanje između dvije metode manje od 5%, što potvrđuje pouzdanost ove metode. HPLC metoda posebno pokazuje veću osjetljivost od tradicionalnih titracijskih metoda pri analizi uzoraka s niskim sadržajem.
6. Ključne napomene
Strogo kontrolirajte pH vrijednost tijekom predobrade uzorka. Ako pH ekstrakta prelazi 3, taloženje kalcijevog oksalata dovest će do niskih rezultata ispitivanja. Mobilnu fazu treba pripremati svježu svakodnevno kako bi se izbjeglo taloženje soli i začepljenje kolone. Nakon svakih 20 injekcija, isperite kolonu smjesom acetonitril-voda (30:70) tijekom 30 minuta kako biste spriječili smanjenje učinkovitosti kolone. Za uzorke koji sadrže pigmente (npr. ljubičasti kupus) preporučuje se dodavanje koraka pročišćavanja ekstrakcijom na čvrstoj fazi prije injekcije.
7. Upute za primjenu i širenje
Ova se metoda može proširiti na detekciju oksalne kiseline u biološkim uzorcima poput urina i krvi. Prilagođavanjem sastava mobilne faze (npr. dodavanjem tetrabutilamonijevog hidroksida), oksalna kiselina i njezini metaboliti mogu se istovremeno odrediti. U kombinaciji s detektorom masene spektrometrije može se uspostaviti preciznija metoda detekcije tragova. U prehrambenoj industriji ova metoda može pružiti važnu podatkovnu podršku za odabir sorti s niskim udjelom oksalne kiseline i optimizaciju procesa kuhanja.
Zibo Anhao Chemical Co., Ltd. – Oksalna kiselina
Zibo Anhao Chemical Co., Ltd. je pouzdan dobavljač i izvoznik visokokvalitetne oksalne kiseline (industrijske kvalitete, min. 99,6%) iz Shandonga u Kini. Naša oksalna kiselina je bijela kristalna krutina, poznata i kao etandionska kiselina, s molekularnom formulom C₂H₂O₄. Odlikuje se visokom čistoćom, niskim udjelom nečistoća i stabilnom kvalitetom u svim serijama, zadovoljavajući zahtjeve tekstilne, kožarske, metalurške, prerade rijetkih zemalja, kemijskog čišćenja i građevinske industrije.
Isporučujemo bezvodnu i dihidratnu oksalnu kiselinu, dostupnu u vrećama od 25 kg, vrećama od 50 kg i vrećama za rasuti teret od 1000 kg. Strogim postupcima kontrole kvalitete, potpunim izvješćima o ispitivanju i fleksibilnim planovima opskrbe osiguravamo stabilnu isporuku i dosljedne performanse za globalne kupce. Naši proizvodi se široko izvoze u jugoistočnu Aziju, Europu, Afriku i Ameriku, stekavši priznanje za pouzdanu kvalitetu i konkurentne cijene.
Odaberite Zibo Anhao Chemical za pouzdanu opskrbu oksalnom kiselinom i profesionalnu kemijsku uslugu na jednom mjestu.
Odaberite Zibo Anhao Chemical za visokočistu oksalnu kiselinu koja pruža stabilne performanse i vrijednost za vaše poslovanje. Kontaktirajte nas za velike narudžbe ili tehničke specifikacije: info@anhaochemical.com
